Jensen Ross Ackles nació el 1 de Marzo de 1978 en Dallas, Texas. Mide 1,85 y su signo del zodiaco es Piscis.
Sus padres son el actor Alan Roger Ackles y Donna Joan Shaffer. Pensaron en llamarle Justin pero terminaron eligiendo el nombre de "Jensen" porque es poco común. Tiene un hermano mayor, Joshua, y una hermana pequeña Mackenzie, y tienen raíces irlandesas, inglesas y escocesas.
No comienza su carrera de actor hasta que se gradúa en el Junior High School en Apollo Junior High y en LV Berkner High School en Richardson en los años 1993 y 1996 respectivamente. Tras ser modelo infantil, Jensen se centró en su carrera de actor desde 1996, hizo pequeños papeles para series de televisión como "Seventh heaven", "Mr. Rhodes", "Sweet Valley High" o "Cybill". En 1997, se unió a la serie Days of Our Lives, en el personaje de "Eric Brady", con el que ganó el Soap Opera Digest Award en 1998 donde consiguió tres nominaciones a los Emmy (1998, 1999, 2000).
Posteriormente Jensen, hizo una película para televisión , titulada "Blonde" basada en la vida de Marilyn Monroe, junto a Patrick Dempsey, el famosísimo Doctor Macizo de Anatomía de Grey. Después, participó como estrella invitada en muchos de los capítulos de la 6º temporada de Dawson´s Creek interpretando el papel de "C.J.". Posteriormente rodó varios episodios para una serie nunca emitida de la Fox, Still life y tuvo un pequeño papel en el corto, The Plight of Clownana. En Dark Angel, comenzó como aparición especial en la primera temporada "Ben/X5-493", personaje que moría en ese mismo capítulo. Sin embargo, en la segunda temporada, entró como protagonista, interprentando el personaje de "Alec/X5-494", hermano gemelo de Ben. Se mantuvo en esta serie, hasta que fue cancelada. (fue cancelada en esa misma temporada)
Quedó segundo por detrás de Tom Welling en el casting de "Smallville", y apareció en la 4º temporada de la serie interpretando al misterioso "Jason Teague", el novio de "Lana Lang", para hacerlo tuvo que rechazar el papel que había obtenido en la serie "Tru Calling", en honor a él le pusieron a este personaje el nombre de Jensen. Justo después de haber participado en Smallville obtiene su primer protagonista como "Dean Winchester" junto a Jared Padalecki en otra exitosa serie de Warner, "Sobrenatural" Donde Ackles y Padalecki interpretan a dos hermanos, a dios gracias que pillo la serie!! Este año va a estrenar una nueva película titulada "Ten inch Hero" - compartiendo cartel con Danneel Harris, su actual pareja fuera de la ficción - y anteriormente hizo "Devour", película en la que también participaba su padre, que curiosamente interpretaba el papel de su padre.
Durante los días 5-10 de junio de 2007, Jensen hizo su primera incursión en los escenarios, en el teatro Casa Mañana, Fort Worth, Texas , junto con Lou Diamond Phillip, con una nueva adaptación de la obra Algunos hombres buenos, como el teniente Daniel Kaffeecon. Durante el estreno estuvo arropado por su familia y no faltó su compañero e inseparable amigo Jared Padalecki. Actualmente se rumorea que pueda interpretar al agente de policía Leon S. Kennedy en una posible cuarta secuela de la serie de películas de Resident Evil. También se ha rumoreado que pueda aparecer en la versión cinematográfica del Capitan America!!. (no quiero ni imaginarme a ese hombre enfundao en traje de licra azul...esto...ainsssss focaliza queme, focaliza...)